NobleRyder DNA連接酶
NobleRyder DNA連接酶NobleRyder CLO01-20KU DNA連接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 20KUNobleRyder CLO01-80KU DNA連接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 80KU
NobleRyder CLO01-20KU DNA連接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 20KU
產(chǎn)品品牌：NobleRyder
產(chǎn)品貨號：CLO01-20KU
產(chǎn)品名稱：DNA連接酶
英文名稱：T4 DNA ligase（Rapid）
產(chǎn)品規(guī)格：20KU
NobleRyder DNA連接酶
產(chǎn)品內(nèi)容：
組分 | CLO01-20KU | CLO01-80KU |
T4 DNA Ligase (400U/μL) | 50 μL | 200 μL |
10 x T4 DNA Ligase Buffer | 100 μL | 0.5 mL |
5 x Rapid Ligase Buffer | 200 μL | 1 mL |
產(chǎn)品簡介
T4 DNA Ligase是從表達(dá)T4 DNA連接酶基因的大腸桿菌中純化而來，可催化雙鏈DNA或RNA上的5'-磷酸末端和3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化粘性末端或平末端之間的連接，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切口。
活性定義
在20μL的連接反應(yīng)體系中，6μg的λDNA-HindⅢ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時，催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。
注意事項
1. 請于使用前確保產(chǎn)品wan全解凍，che底混勻后短暫離心，置于冰上備用。
2. T4 DNA Ligase 不穩(wěn)定，使用時冰上操作，用完立即放回-20℃。
3. 反復(fù)凍融會影響產(chǎn)品的性能。
4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
實(shí)驗方法
1.DNA片段與載體連接（粘性末端連接）
①冰上配制連接反應(yīng)體系：
試劑 | 體積 |
線性化載體DNA | 20~100 ng |
插入片段DNA | 3:1~10:1（片段：載體摩爾比） |
10 x T4 DNA Ligase Buffer | 1 μL |
T4 DNA Ligase (400U/μL) | 1 μL |
DNase-Free Water | Up to 10 μL |
②反應(yīng)條件：
25 ℃反應(yīng)10 min。
2.DNA片段與載體連接（平末端連接）
①冰上配制連接反應(yīng)體系：
試劑 | 體積 |
線性化載體DNA | 20~100 ng |
插入片段DNA | 1:1~5:1（片段：載體摩爾比） |
5 x Rapid Ligase Buffer | 2 μL |
T4 DNA Ligase (400U/μL) | 2 μL |
DNase-Free Water | Up to 10 μL |
* 平末端載體與片段進(jìn)行連接時，應(yīng)首先將載體進(jìn)行去磷酸化處理，防止其自身環(huán)化。
②反應(yīng)條件：
25 ℃反應(yīng)1 h或16 ℃過夜。
3. DNA 文庫構(gòu)建中接頭連接反應(yīng)
①冰上配制連接反應(yīng)體系：T4 DNA Ligase (400U/μL)
試劑 | 體積 |
dA-tailed DNA | 10 μL |
DNA Adapter | 1:10~1:20（dA-tailed DNA : DNA Adapter 摩爾比） |
5 x Rapid Ligase Buffer | 4 μL |
T4 DNA Ligase(400U/μl) | 2 μL |
DNase-Free Water | Up to 20 μL |
②反應(yīng)條件：
25 ℃反應(yīng)10 min。
如需失活T4 DNA Ligase在 65℃反應(yīng)10 min 或者 70℃反應(yīng) 5 min。
產(chǎn)品訂購信息：
NobleRyder CLO01-20KU DNA連接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 20KU
NobleRyder CLO01-80KU DNA連接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 80KU
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